小鹅瘟和雏鹅新型病毒性肠炎二联PCR检测试剂盒组装和初步应用

摘要：

【摘要】本试验旨在研制小鹅瘟和雏鹅新型病毒性肠炎二联PCR检测试剂盒,观察临床应用效果。根据小鹅瘟和鹅病毒性肠炎基因序列,设计合成一对特异性引物,对PCR反应条件进行优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、重复性和保存期进行研究,之后进行临床扩大试验。该二联PCR诊断试剂盒能扩增出预期的小鹅瘟375bp核酸片段和鹅病毒性肠炎223bp核酸片段,与鸭瘟病毒、鹅副黏病毒无交叉反应;最低能检测到小鹅瘟病毒104 ELD50/mL,雏鹅新型病毒性肠炎病毒2.5×10-1ELD50;不同批次的试剂盒对同一样品检测结果一致;常温下至少可保存5个月;临床应用效果显著。该二联PCR检测试剂盒能够对小鹅瘟和雏鹅病毒性肠炎早期诊断、流行病学调查和卫生检疫提供了检测手段。
【关键词】小鹅瘟；雏鹅新型病毒性肠炎； PCR检测试剂盒；研制；应用；

引言：

【引言】小鹅瘟（ｇｏｓｌｉｎｇ　ｐｌａｇｕｅ，ＧＰ）和雏鹅新型病毒性肠炎（ｇｏｓｌｉｎｇ　ｎｅｗ　ｔｙｐｅ　ｖｉｒａｌ　ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ，ＮＧＶＥ）发病率和死亡率很高，对养鹅业危害极大。本研究在建立了小鹅瘟和雏鹅病毒性肠炎二联ＰＣＲ检测方法的基础上（孙健等，２０１０），进一步组装ＰＣＲ快速检测试剂盒，从而为小鹅瘟和雏鹅病毒性肠炎检测的推广应用奠定基础。目前国内外已成功开发出了两种疫病的单重ＰＣＲ检测试剂盒，且开始应用于快速检测诊断中，但检测种类单一且尚未能进行实地现场监测，给实际生产应用带来了困难。因此，针对服务对象的要求，本研究通过对两种疫病的二联ＰＣＲ检测方法的条件优化，组装快速检测试剂盒，并通过临床使用对其进行了性能的初步验证分析，取得了较满意的结果。

作者：

任科研

作者单位：

吉林省畜牧兽医科学研究院；