摘要：
【摘要】 从缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)cDNA文库中筛选出一条热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)同源序列,采用EST扩增和5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,RACE)扩增方法获得全长cDNA序列,共2 335 bp,包括76 bp的5′非翻译区和309 bp的3′非翻译区,以及1 950 bp的开放阅读框。阅读框共编码649个氨基酸,推算的分子量约为70.89 kD,理论等电点为5.28。氨基酸序列分析结果表明,该基因的氨基酸序列含有HSP70家族的3个签名序列,2个糖基化位点,1个ATP-GTP结合位点,且C末端具有GGXP四肽重复序列以及细胞质特异性调控基序EEVD。该基因是组成型HSC70(Heat shock cognate 70)亚家族基因成员,被命名为ScHsc70。基于氨基酸序列的双壳贝类聚类分析表明,缢蛏与南极帽贝(Laternula elliptica)、文蛤(Meretrix meretrix)的亲缘关系最近。荧光定量表达分析显示,ScHsc70 mRNA在缢蛏水管、鳃、斧足、外套膜、肝和性腺等组织中以不同水平存在,其中在外套膜中的表达量最低,而在水管和肝中的表达量最高。经副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和副鳗弧菌(V.anguillarum)诱导后,ScHsc70 mRNA在缢蛏肝中的水平呈现先升高后下降的变化趋势,且分别在感染后的第20小时和第30小时达到最高。结果提示,缢蛏ScHsc70基因可能参与了对细菌感染的防御反应。
【关键词】 缢蛏； 热休克蛋白70； 序列分析； 基因表达；
【基金】 国家高技术研究发展计划项目(2006AA10A410);福建省海洋与渔业局重点项目(闽海鱼2007015);上海高校创新团队建设项目;上海高校选拔培养优秀青年教师科研专项基金(SSC09016)
引言：
【引言】热休克蛋白(heat shock protein, HSPs)是生物体在应对各种物理、化学和微生物应激时启动表达的一组结构上非常保守的特殊蛋白质, 它们能快速调整细胞的存活机能, 保护细胞抵御损伤并有助于细胞恢复正常的结构和机能。热休克蛋白70(HSP70)是一族最保守和最重要的热休克蛋白家族, 也是目前热休克蛋白家族中研究最为深入的一种。分子量为72~80 kD 的HSP70 家族成员最多, 共有21 种蛋白质, 是一组进化上高度保守的应激蛋白, 按表达情况可分为组成型HSC70(heat shock cognate 70)和诱导型HSP70。HSP70 广泛分布于细胞核、细胞质、内质网、线粒体和叶绿素等细胞的各个部分, 广泛参与各种机体和细胞的活动。近年来, 许多研究表明,HSP70 具有分子伴侣、抗细胞凋亡、抗氧化和免疫调节等重要功能。当机体处于应激状态下, HSP70 会大量表达, 因此有人认为HSP70 的表达高低可间接反映机体的应激耐受水平。
